DESARROLLO DEL DIAGNÓSTICO DE AMILOIDOSIS POR ESPECTROMETRÍA DE MASAS. (#21139)
Objetivos
La amiloidosis es una enfermedad poco frecuente que surge de proteínas mal plegadas que forman depósitos fibrilares insolubles en diversas regiones del cuerpo. El tejido blanco, así como la progresión y la severidad de la enfermedad, dependen de la proteína que forma el depósito fibrilar. Identificar estas proteínas es crucial para determinar el tratamiento. El gold standard para la identificación consiste en una microdisección láser (LMD) del material birrefringente teñido con Rojo Congo y posterior análisis mediante cromatografía líquida (LC) seguido de espectrometría de masas en tándem (MSMS). Este ensayo se realiza en muy pocos lugares del mundo; ninguno de ellos en América Latina. El Hospital Italiano de Buenos Aires, junto al Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME/Conicet) y CEQUIBIEM, pretenden desarrollar esta técnica diagnóstica para ofrecer como servicio en Argentina y América Latina.
Materiales y Métodos
El estudio incluyó muestras patológicas de diversos órganos afectados por amiloidosis y muestras de control. Estas muestras consistieron en preparados histopatológicos teñidos con Rojo Congo, y cortes de biopsias fijadas en parafina. En el IBYME se puso a punto la microdisección láser; en el CEQUIBIEM se estandarizó el protocolo de extracción de proteínas de las microdisecciones y de las secciones de biopsias previamente mencionadas. El análisis de las muestras patológicas y las de control se realizó a traves del equipo Orbitrap (QExactive) pareado con NanoHPLC, de ThermoScientific. En todos los casos, el HIBA ya disponía del diagnóstico confirmado de amiloidosis de cada paciente, a partir de datos clínicos, de laboratorio e histopatológicos.
Resultados
Se incluyeron un total de 17 muestras: 9 de corazón, 2 de cavidad bucal, 1 de hígado, 1 de laringe, 1 de recto y 3 de control de orígen cardíaco. En 6 de las 9 muestras en las que se realizó microdisección láser se detectó la proteína amiloidogénica. De los 14 cortes de biopsias fijadas en parafina que se analizaron directamente por cromatografía líquida seguida de espectrometria de masa en tándem, se detectó la proteína amiloidogénica en todas ellas. En la totalidad de los casos, se identificaron las 5 proteínas que en la literatura se describen como “signature” que acompañan a la fibra amiloide (Apolipoproteina A-IV. Apolipoproteina A-I; Apolipoproteina E, Serumamyloid y Vitronectina).
Además, se detectaron gran cantidad de proteínas amiloidogénicas en biopsias no microdiseccionadas, lo que sugiere una acumulación granular en comparación con las muestras microdiseccionadas.
Conclusiones
Es necesario realizar más análisis de diversas muestras de tejido y los controles correspondientes, pero los hallazgos iniciales indican perspectivas prometedoras para el desarrollo y la aplicación de la técnica. Este esfuerzo de colaboración tiene potencial para mejorar las capacidades de diagnóstico y las estrategias terapéuticas para la amiloidosis en la región.
Tipo: Comunicaciones Libres
Palabras clave: Amiloidosis,Espectrometria,Proteomica
Categorias: Medicina Hospitalaria
Institución: HIBA
Ciudad: Almagro , Capital Federal
País: Argentina
Autores